โครงการตั้งอยู่บนทางหลวงหมายเลข 3394 สายลูกแก – รางพิกุล มีจุดเริ่มต้นโครงการประมาณ กม.0+000 อยู่ในเขตพื้นที่ตำบลดอนขมิ้น อำเภอท่ามะกา จังหวัดกาญจนบุรี และจุดสิ้นสุดโครงการ ประมาณ กม.21+800 อยู่ในเขตพื้นที่ตำบลรางพิกุล อำเภอกำแพงแสน จังหวัดนครปฐม มีระยะทางรวมประมาณ 21.800 กิโลเมตร มีพื้นที่ศึกษาครอบคลุมระยะ 500 เมตร จากกึ่งกลางแนวเส้นทางโครงการ ครอบคลุมพื้นที่ 9 ตำบล 3 อำเภอ 3 จังหวัด ดังนี้ จังหวัด อำเภอ ตำบล การปกครองส่วนท้องถิ่น กาญจนบุรี อำเภอท่ามะกา ตำบลท่าเสา เทศบาลตำบลท่าเสา     ตำบลดอนขมิ้น เทศบาลตำบลดอนขมิ้น     เทศบาลตำบลลูกแก*     ตำบลยางม่วง เทศบาลตำบลยางม่วง     ตำบลสนามแย้ องค์การบริการส่วนตำบลสนามแย้ ราชบุรี อำเภอบ้านโป่ง ตำบลท่าผา เทศบาลเมืองท่าผา     ตำบลกรับใหญ่ เทศบาลตำบลกรับใหญ่     เทศบาลตำบลห้วยกระบอก* นครปฐม อำเภอกำแพงแสน ตำบลทุ่งลูกนก องค์การบริหารส่วนตำบลทุ่งลูกนก     ตำบลห้วยหมอนทอง องค์การบริหารส่วนตำบลห้วยหมอนทอง     ตำบลรางพิกุล องค์การบริหารส่วนตำบลรางพิกุล 3 จังหวัด 3 อำเภอ 9 ตำบล 10 องค์กรปกครองส่วนท้องถิ่น หมายเหตุ : *หมู่ที่ 1 และหมู่ที่ 9 อยู่ในการปกครองบางส่วนของเทศบาลตำบลลูกแก *พื้นที่บางส่วนของ หมู่ที่ 9 ตำบลกรับใหญ่ * พื้นที่การศึกษาโครงการอาจมีการปรับเปลี่ยนตามพื้นที่ศึกษาด้านสิ่งแวดล้อมของโครงการ การศึกษาด้านสิ่งแวดล้อม           การจัดทำการศึกษาผลกระทบสิ่งแวดล้อมเบื้องต้นยึดตามแนวทางในการจัดทำรายงานการประเมินผลกระทบสิ่งแวดล้อมของโครงการทางหลวง (Guidelines for Preparation of Environmental Impact Statement of a Road Scheme: ปรับปรุง ครั้งที่ 10 เดือนมกราคม 2569) ครอบคลุมประเด็นปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม 31 ปัจจัย